启动子活性与转录因子验证
服务简介
启动子相当于“基因开关”，能够控制基因表达的开启和关闭。而启动子的活性受转录因子的调节，转录因子是一种具有调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。一些转录因子仅与其靶基因启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起到抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因分析(luciferase assay)是检测这类转录因子和其靶基因启动子中的特异顺式元件结合的重要技术。
普舟基因采用的是报告质粒为pGL3-Basic，内参质粒是pRL-TK。通过将靶基因启动子的特定片段插入到pGL3-Basic载体中荧光素酶编码序列上游作为荧光素酶的启动子序列，再与转录因子表达质粒和内参质粒共转染细胞，裂解后加入特定的荧光素酶底物，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是否能与该靶基因启动子片段作用。结合定点突变等方法则可进一步确定转录因子与靶基因启动子的作用位点。
pGL3-Basic图谱 pRL-TK图谱
服务流程
服务研究内容
Ø 启动子活性验证：验证转录因子与启动子是否存在相互作用；
Ø 转录因子与启动子作用位点研究：通过截短、潜在结合位点突变验证转录因子与启动子的结合位点；
Ø 增强子/沉默子等顺式作用元件跟转录因子的研究分析；
客户提供
1、 转录因子和启动子信息；
2、指定转染细胞，如无特定要求，一般选择293T细胞；
实验分组
备注：通过第一组和第二组判别启动子活性
交付产品
1、原始数据、整理结果图片；
2、质粒构建报告及测序结果；
3、完整的实验报告；